¿Cuál es la diferencia entre ELISA directo e indirecto?

los diferencia principal entre ELISA directo e indirecto es que en ELISA directo, el anticuerpo primario se conjuga directamente con la enzima de detección mientras que, en ELISA indirecto, un anticuerpo secundario que es complementario al anticuerpo primario se conjuga con la enzima de detección. Esto significa que el ELISA directo usa un solo anticuerpo, mientras que el ELISA indirecto usa dos anticuerpos.

ELISA directo e indirecto son dos métodos de ELISA (ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas) utilizados para detectar la presencia de un antígeno o anticuerpo específico en el medio.

Áreas clave cubiertas

1. ¿Qué es ELISA directo?
     - Definición, Procedimiento, Características.
2. Qué es ELISA indirecto
     - Definición, Procedimiento, Características.
3. ¿Cuáles son las similitudes entre ELISA directo e indirecto?
     - Esquema de características comunes
4. ¿Cuál es la diferencia entre ELISA directo e indirecto?
     - Comparación de diferencias clave

Términos clave

ELISA directo, enzima de detección, ELISA indirecto, anticuerpo primario, anticuerpo secundario, sustrato

¿Qué es ELISA directo?

El ELISA directo es un método de ELISA que permite la detección del antígeno con un anticuerpo primario unido a una enzima. Este método ELISA se desarrolló por primera vez en Perlmann y Engvall. Se considera como la forma más simple de ELISA. Los pasos de ELISA directo se enumeran a continuación:

1. Recubrir la superficie de la placa con la muestra;
2. Incubación de la placa con el anticuerpo primario conjugado con enzima;
3. Lavado para la eliminación de anticuerpos no unidos de la placa;
4. Adición del sustrato requerido por la reacción enzimática;
5. Detección de las señales producidas desde la placa..

Aquí, los dos tipos principales de enzimas conjugadas con el anticuerpo primario son HRP (peroxidasa de rábano picante) y fosfatasa alcalina. Los tres tipos de sustratos utilizados junto con el HRP son OPD (dihidrocloruro de o-fenilendiamina), TMB (3, 3 ', 5, 5'-tetrametilbencidina) y ABTS (2, 2'-Azinobis [3-etilbenzotiazolina-6- ácido sulfónico] -diamonio sal). El sustrato utilizado junto con la fosfatasa alcalina es PNPP (fosfato de p-nitrofenilo, sal disódica). La reacción enzimática en el sustrato provoca un cambio de color en el medio, que depende del tipo de sustrato y la enzima utilizada para la reacción. Esto facilita la detección de muestras con el antígeno diana.. 

Figura 1: ELISA directo

El ELISA directo es más adecuado para la detección de la cantidad de antígeno de alto peso molecular en una muestra. El menor número de pasos en este método ELISA lo hace un ensayo más rápido. Sin embargo, debido al costo y al tiempo incorporado en el etiquetado del anticuerpo primario con enzimas, el uso de ELISA directo es bastante raro. Por otro lado, también produce efectos adversos en el antígeno objetivo..

Qué es ELISA indirecto

El ELISA indirecto es otro método de ELISA que utiliza dos anticuerpos para la detección: anticuerpo primario y secundario. Los pasos del ELISA indirecto son los siguientes:

1. Recubrir la superficie de la placa con la muestra;
2. Incubación de la placa con el anticuerpo primario;
3. Lavado para eliminar los anticuerpos no unidos de la placa;
4. Incubación de la placa con el anticuerpo secundario conjugado con la enzima de detección;
5. Lavado para eliminar los anticuerpos no unidos de la placa;
6. Adición del sustrato requerido por la reacción enzimática;
7. Detección de las señales producidas desde la placa..

   Figura 2: ELISA indirecto

El ELISA indirecto se realiza a través de dos pasos de unión de anticuerpos. Por otro lado, el anticuerpo secundario se conjuga con la enzima de detección. En general, hay muchos anticuerpos secundarios conjugados con enzimas. Aquí, el anticuerpo secundario es principalmente un anticuerpo policlonal, anti-especie. Debido a la disponibilidad de anticuerpos conjugados con enzimas, el método ELISA indirecto se usa más a menudo en ensayos inmunológicos para la detección de parásitos, bacterias y virus. Por otro lado, varios anticuerpos secundarios pueden unirse al anticuerpo primario en la placa. Por lo tanto, la sensibilidad del ensayo es muy alta..

Similitudes entre ELISA directo e indirecto

• ELISA directo e indirecto son dos métodos de ELISA en los cuales el antígeno de interés se adhiere directamente a la placa..
• Ambos métodos implican la detección de la presencia de una molécula de proteína específica en una muestra. Esta molécula de proteína está directamente unida a la placa..
• En ambos métodos se utilizan placas de 96 pocillos o tubos de tiras de 8 pocillos. Ambas placas y tubos están hechos de poliestireno. Las placas de 96 pocillos proporcionan muchos espacios para la determinación de la dilución óptima para la reacción. Mientras tanto, los tubos de tiras de 8 pocillos son mejores para los ensayos finamente ajustados.

Diferencia entre ELISA directo e indirecto

Definición

Elisa directa se refiere a un tipo de ELISA en el que el anticuerpo primario está conjugado con la enzima de detección, mientras que el ELISA indirecto se refiere a un tipo de ELISA en el que el anticuerpo secundario está conjugado con la enzima de detección.

Número de anticuerpos utilizados

El ELISA directo usa un anticuerpo, que es el anticuerpo primario, mientras que el ELISA indirecto usa dos anticuerpos, el primario y el secundario. Esta es la principal diferencia entre ELISA directo e indirecto..

La enzima de detección está vinculada a

Además, la enzima de detección está vinculada al anticuerpo primario en ELISA directo, mientras que la enzima de detección está vinculada al anticuerpo secundario en ELISA indirecto.

Intensidad de las señales

Otra diferencia entre el ELISA directo e indirecto es que las señales producidas por el ELISA directo son menos intensivas, mientras que las señales producidas por el ELISA indirecto son más intensivas debido a la amplificación de la señal..

Señales de fondo

Sin embargo, el ELISA directo produce más señales de fondo que el ELISA indirecto..

Sensibilidad

El ELISA directo es menos sensible, mientras que el ELISA indirecto es más sensible. Esta es también una diferencia entre ELISA directo e indirecto.. 

Reactividad cruzada

Otra diferencia más entre el ELISA directo e indirecto es la reactividad cruzada. Es decir, la reactividad cruzada es mínima en ELISA directo mientras que es significativa en ELISA indirecto.

Hora

Además, el ELISA directo requiere menos tiempo debido a los menos pasos, mientras que el ELISA indirecto requiere más tiempo debido a los pasos duplicados de unión al anticuerpo..

Frecuencia de uso

Mientras que el ELISA directo es relativamente raro, el ELISA indirecto es más común.

Conclusión

El ELISA directo solo utiliza el anticuerpo primario para la detección de un antígeno específico. Esto significa que el anticuerpo primario se conjuga con la enzima de detección en ELISA directo. Pero, el ELISA indirecto utiliza un anticuerpo primario para unirse con el antígeno, mientras que el anticuerpo secundario conjugado con enzimas se une al anticuerpo primario. El ELISA directo es menos común debido a la menor disponibilidad de anticuerpos primarios conjugados con enzimas. La principal diferencia entre ELISA directo e indirecto es el número de anticuerpos utilizados.

Referencia:

1. "Tipos de ELISA". Bio-rad, Laboratorios Bio-Rad, disponibles aquí

Imagen de cortesía:

1. "Diagrama ELISA" Por Cavitri - Trabajo propio (CC BY 3.0) a través de Commons Wikimedia  
2. “ELISA indirecto” por Cawang - Trabajo propio (CC0) a través de Commons Wikimedia